共聚焦拉曼光譜技術(shù)結(jié)合了共焦光學(xué)的使用，將樣品檢測(cè)范圍縮小到了極小的體積(1 μm3)，并且拉曼光譜具有區(qū)分化學(xué)鍵的能力。因此，共聚焦拉曼光譜可以提供一種高分辨率的方法來(lái)檢測(cè)例如染色體結(jié)構(gòu)域的組成。

使用共聚焦拉曼光譜技術(shù)研究染色體的初步結(jié)果表明，蛋白質(zhì)與脫氧核糖核酸的比例在多線帶狀染色體上的變化很大，其中在帶內(nèi)最高，在帶間區(qū)域較低，在端粒處最低。共聚焦拉曼光譜還可以與免疫熒光技術(shù)相結(jié)合，檢測(cè)特定抗體標(biāo)記的位點(diǎn)，并對(duì)這種標(biāo)記技術(shù)干擾天然結(jié)構(gòu)的程度提供積極有用的檢查。
下圖的應(yīng)用研究的對(duì)象是多線染色體的帶型，測(cè)量是在共聚焦拉曼光譜儀上進(jìn)行的，激發(fā)光波段為660納米，激光功率為20毫瓦，63倍水浸物鏡的NA為1.2，測(cè)量時(shí)間為20 分鐘。研究對(duì)象是來(lái)自生理分離的搖蚊唾液腺染色體，這些染色體的帶狀圖案能在光學(xué)顯微鏡下很容易的觀測(cè)到。將激光聚焦成直徑0.5微米的光斑，出射激光束在樣品上掃描，拉曼信號(hào)通過(guò)光柵成像ccd相機(jī)上，這種方式可以同時(shí)記錄染色體掃描線上的光譜信息。在圖1中，顯示了來(lái)自搖蚊多線染色體的線掃描拉曼圖像光譜信息，光譜信息在水平方向。而顯示在另一個(gè)方向上的染色體的橫向方向被證明具有0.5 微米數(shù)量級(jí)的分辨率。從該拉曼光譜圖像中通過(guò)使用1094波數(shù)的DNA主鏈振動(dòng)和1449 波數(shù)的蛋白質(zhì)振動(dòng)可以獲得關(guān)于染色體上的DNA和蛋白質(zhì)含量的信息。這些數(shù)據(jù)表明，搖蚊唾液腺染色體帶和帶間的DNA含量在1:0.9和1:0.6之間變化(帶:帶間)，而蛋白質(zhì)含量的比例似乎跟隨著脫氧核糖核酸的含量，更確切的關(guān)系還有待進(jìn)一步證明。

圖1:一部分生理分離的搖蚊多線染色體的線掃描拉曼圖像(右邊)

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