721型分光光度計(jì)是分光光度法在可見(jiàn)光譜區(qū)范圍（360一800nm）內(nèi)，進(jìn)行定量分析常用的儀器之一。分光光度法以物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收為根據(jù)，以朗伯-比爾定律（A＝ Kbc）為基礎(chǔ)來(lái)進(jìn)行定量測(cè)定。

　　一、721型分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)和工作原理

　　721型分光光度計(jì)由光源、單色器、吸收池和監(jiān)測(cè)系統(tǒng)四大部分組成，全部裝成一體，其結(jié)構(gòu)如附圖1.5（a）所示。

　　721型分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)如附圖1.5（b）所示。

　　721型分光光度計(jì)采用自準(zhǔn)式光路，單光束。利用12V25W鎢絲白熾燈泡作光源。由光源1發(fā)出連續(xù)輻射線，經(jīng)聚光透鏡2和反射鏡7后，成為平行光束，經(jīng)入射狹縫6及準(zhǔn)直鏡4反射到單色光器（721型分光光度計(jì)的單色光器是棱鏡）3，經(jīng)棱鏡色散后的光反射至準(zhǔn)直鏡4，再經(jīng)狹縫6，聚光透鏡9，變成平行的單色器照射到樣品池（比色皿）10，經(jīng)樣品池吸收后透過(guò)的光照射到光電管13上，光電管受光進(jìn)行光電轉(zhuǎn)換產(chǎn)生光電流，經(jīng)放大器放大后輸送至檢流計(jì)，由表頭直接顯示出透光率（T%）或吸光度（A）。

　　準(zhǔn)直鏡4裝在可旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤上，由波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器控制，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器時(shí)，利用阿基米得螺線凸輪可帶動(dòng)準(zhǔn)直鏡轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動(dòng)，從而可在出射狹縫后面得到所需波長(zhǎng)的單色光。通過(guò)調(diào)節(jié)出射狹縫6的寬度，就可獲得適合測(cè)量的光強(qiáng)。

　　二、721型分光度儀器安裝及使用前檢查

　　①儀器應(yīng)安裝在干燥房間內(nèi)，使用時(shí)應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上。室內(nèi)光線不宜太強(qiáng)，夏天不能用電風(fēng)扇直吹儀器，以防燈泡燈絲發(fā)光不穩(wěn)而影響測(cè)量。

　　②在未接上電源前，應(yīng)對(duì)儀器的安全性進(jìn)行檢查。電源線應(yīng)牢固，通地要良好，各旋鈕的起始位置應(yīng)正確。

　　③檢查放大器及單色器的兩個(gè)矽膠干燥筒，如受潮變色（干燥時(shí)為藍(lán)色，受潮后變紅色），應(yīng)予更換（在儀器底部的干燥筒，可側(cè)豎儀器來(lái)檢查或更換）。

　　④儀器在未接通電源前，電表必須位于“0“刻線，否則要利用電表上的校正螺絲調(diào)至“0”處。

　　三、721型分光度儀器的操作方法

　　721型分光光度計(jì)外形如圖1.5（c）所示。

　　①先進(jìn)行“使用前檢查”，一切正常后，打開(kāi)比色池暗箱蓋7，接通電源6，預(yù)熱約20 min。

　　②調(diào)節(jié)波長(zhǎng)選擇旋鈕（λ）2至所需波長(zhǎng)，靈敏度調(diào)節(jié)鈕1放在“1”位置。調(diào)節(jié)“0“電位器3，校正電表8指針指0。

　　③將裝有參比溶液及待測(cè)溶液的比色皿按順序放入比色架上，使參比溶液處于光路位置，輕輕蓋上比色皿暗箱蓋，使光電管受光，調(diào)節(jié)“100%”電位器4至電表指針達(dá)滿刻度（T100％或A＝0）處。

　　④如果放大器靈敏度不合適（即③中不能調(diào)滿刻度），可重新調(diào)整靈敏度調(diào)節(jié)旋鈕（放大器靈敏度有三擋，是逐步增大的，“1”最低，其選擇原則是保證能使空白時(shí)調(diào)滿刻度，盡可能采用靈敏度較低擋，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性），如果靈敏度不夠，可逐漸升高，但改變靈敏度后，必須按③重新校正“0”和“100%“。

　　⑤按③連續(xù)調(diào)整“0”和“100%“，直至穩(wěn)定。至此調(diào)校完畢，即可進(jìn)行測(cè)定工作。

　　⑥輕輕拉動(dòng)比色皿架拉桿5，使待測(cè)液置于光路位置，即可讀取表頭指針?biāo)傅淖x數(shù)（T%或A值）。

　　⑦測(cè)量完畢，打開(kāi)比色皿暗箱蓋。

　　⑧實(shí)驗(yàn)結(jié)束，關(guān)閉電源，將比色皿取出洗凈，用軟紙擦凈比色皿架及暗箱蓋，蓋上暗箱蓋，散熱后，罩好儀器罩。

　　四、分光度注意事項(xiàng)

　　①使用721型分光光度計(jì)時(shí)，連續(xù)光照光電管的時(shí)間不可太長(zhǎng)，以避免光電管疲勞。不測(cè)定時(shí)，必須打開(kāi)暗箱蓋，切斷光路，以延長(zhǎng)光電管的使用壽命。

　　②根據(jù)需要選擇使用不同厚度的比色皿，同一厚度的一套比色皿應(yīng)檢查使用。方法是使一套比色皿盛裝同一種有色溶液，測(cè)其透光率相對(duì)值，該值最大相差不應(yīng)超過(guò)0.5%。

　　③拿取比色皿時(shí)，只能用手捏毛玻璃面，切不可用手捏透光面，以免污損而影響透光性能。比色皿外壁的水珠應(yīng)用鏡頭紙或柔軟的吸水紙輕輕揩擦，不可用硬紙或用力擦拭。

　　④比色皿盛裝溶液時(shí)，以裝滿2/3為宜，不可過(guò)滿或太淺，以防拉動(dòng)比色皿架時(shí)濺出或影響測(cè)定。對(duì)系列溶液的測(cè)量，應(yīng)按從稀到濃的順序依次進(jìn)行，以減小誤差。

　　⑤比色皿應(yīng)用鹽酸-乙醇（（1:2）混合液或1:1HN03溶液浸泡，再用自來(lái)水，蒸餾水洗滌，不可用堿液、氧化性強(qiáng)的洗滌液（如鉻酸洗液）洗滌，以防腐蝕或造成粘接縫開(kāi)裂。也不能用毛刷洗，以免損壞其透光面，更不能在爐子、火焰上或烘箱內(nèi)加熱干燥。

　　⑥在分析工作中，根據(jù)有色溶液的濃度的大小選用合適規(guī)格的比色皿，以使溶液吸光度控制在0.2一0.8范圍內(nèi)，以減小測(cè)量誤差。