微流控電阻抗譜測量

微流控技術(shù)（Microfluidics）作為一種在微觀尺寸下操控微量體積流體的技術(shù)，是一門新興的交叉學(xué)科，涉及微機械、流體、物理、材料、生物、化學(xué)和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域 。因為具有微型化、集成化等特征，微流控裝置通常被稱為微流控芯片，也被稱為芯片實驗室（Lab on a Chip）和微全分析系統(tǒng)（micro-Total Analytical System（μTAS））。目前，微流控被認為在生物醫(yī)學(xué)研究中具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V泛的應(yīng)用前景。

生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展對細胞和亞細胞成分（細胞核，RNA，DNA）的電阻抗譜測量提出了更高的要求。與過去的幾 MHz?的頻率范圍相比，現(xiàn)在的應(yīng)用范圍已經(jīng)擴展到了更高的頻段，并且同時需要具備更高的測量靈敏度。此外，在幾個頻率上同時進行測量的能力也很重要，因為這意味著可以在微流控中實時獲取細胞的阻抗曲線。

目前有三種常見的方法來觀察微流控通道中細胞的大小和速度。

第一種：是基于光學(xué)方法的細胞計數(shù)。它需要使用激光照射微流控通道中已經(jīng)標(biāo)記好的細胞，并檢測產(chǎn)生的散射或熒光。除了使用的染料可能有毒或昂貴之外，維護和設(shè)置激光及檢測系統(tǒng)同樣會限制該技術(shù)的便攜性和耐用性。

第二種：是基于圖像的細胞計數(shù)。它依賴于高速相機的使用。在使用其它設(shè)備將細胞分類到不同通道之前，您需要通過進行圖像處理來判斷細胞的大小。普通攝像機的幀速會限制其檢測速度，每記錄一幀可能需要 200?微秒的時間。

第三種：是選擇阻抗細胞計數(shù)法。它具有快速的響應(yīng)時間，無需標(biāo)記且可集成分類操作。該技術(shù)基于監(jiān)控細胞通過微流控通道中兩個電極對時產(chǎn)生的介電特性的變化。其中一種方法使用鎖相放大器，例如 OE2042，和匹配的電流放大器（Current Amplifier，CA） 來測量微流控通道中兩個電極對之間電流的變化，具體連線如圖1所示。由于實驗中使用了差分電流測量的方法來測量電流的變化，來自流體的背景信號會在很大程度上被抑制。這使得測量到的電流信號更清晰，方便您從中推斷出細胞的大小和速度。

詳細微流控實驗裝置如圖1所示，細胞懸浮液經(jīng)過注射泵（Syringe pump，neMESYS，ce[1]toni GmbH，Korbussen，Germany）通過聚四氟乙烯管道（PTFE tube）進入微流控芯片（Microfluidic device）。懸浮液流速保持在 0.5 μL/min。由壓力控制器（Pressure controller，OB1 MK3+，Elveflow，Paris，F(xiàn)rance）提供壓強使得捕獲孔位內(nèi)外兩側(cè)壓強不同從而進行細胞或測試微粒的捕獲。而后由數(shù)字鎖相放大器（DLIA）提供 1Vpp?的激勵信號對捕獲的細胞或測試微粒進行激勵而后測量微流控芯片中反饋的電流信號。經(jīng)由電流放大器（Current Amplifier，CA）轉(zhuǎn)換為電壓信號方便數(shù)字鎖相放大器測量。然后在計算機（PC）端收集數(shù)據(jù)并計算細胞的阻抗信息。

Figure1.?微流控阻抗測試的整體架構(gòu)圖 (b).微流體裝置的顯微照片（比例尺為100 μm）

Figure2.?細胞微流控阻抗測量結(jié)果（標(biāo)尺為 5 μm）

在幅頻響應(yīng)曲線（圖2-b）中，沒有捕獲到粒子以及捕獲到不同粒子的 幅頻響應(yīng)曲線在低頻域與高頻域都混合在一起難以分辨，而單靠幅頻響應(yīng)曲線難以確定 最佳的頻率點來區(qū)分粒子，故對測量得到的幅頻響應(yīng)曲線做歸一化處理，即如下式所示進行計算。

Ar = A Ae

其中 A?為不同粒子捕獲后測量的幅值，Ae?為沒有捕獲到粒子是測量得到的幅值。經(jīng)過歸一化處理后可以看到，在頻率為 2.5 MHz?時測量所得幅值最容易區(qū)分不同粒子。 故將輸入激勵信號的頻率固定為 2.5 MHz?后重新對不同粒子進行多次測量，得到的結(jié) 果如圖2-28d?所示。可以看到，針對不同粒子進行多組測量后得到的 6 μm?粒子平均幅 值為 0.9651，標(biāo)準(zhǔn)差（SD）為 0.0030，波動系數(shù)（CV）為 0.3141%，8 μm?粒子平均幅值 為 0.9514，標(biāo)準(zhǔn)差為 0.0028，波動系數(shù)為 0.2703%，10 μm?粒子平均幅值為 0.9384，標(biāo) 準(zhǔn)差為 0.0032，波動系數(shù)為 0.3387%。極小的標(biāo)準(zhǔn)差和波動系數(shù)表明本次測量的靈敏度 與穩(wěn)定性都非常高，而差異明顯的幅值平均值也是區(qū)分粒子的有力證據(jù)。

審核編輯：符乾江