熒光光譜概述

熒光光譜先要知道熒光，熒光是物質(zhì)吸收電磁輻射后受到激發(fā)，受激發(fā)原子或分子在去激發(fā)過程中再發(fā)射波長與激發(fā)輻射波長相同或不同的輻射。當(dāng)激發(fā)光源停止輻照試樣以后，再發(fā)射過程立刻停止，這種再發(fā)射的光稱為熒光。熒光光譜有以下幾個特點：

靈敏度高：熒光分析的最大特點是靈敏度高，通常情況下要比分光光度計的靈敏度高出2-3個數(shù)量級。

選擇性強：包括激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，在鑒定物質(zhì)時，通過選擇波長可以使分子熒光分析有多種選擇。

試樣量少和方法簡便。

能提供比較多的物理參數(shù)：如激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等參數(shù)。這些參數(shù)反映了分子的各種特性，并通過它們可以得到被檢測分子的更多信息。

熒光光譜怎么測

原理：

原子外層電子吸收光子后，由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，再回到較低能級或者基態(tài)時，發(fā)射出一定波長的輻射，稱為熒光。

（1）激發(fā)光譜

是指發(fā)光的某一譜線或譜帶的強度隨激發(fā)光波長（或頻率）變化的曲線。橫坐標(biāo)為激發(fā)光波長，縱坐標(biāo)為發(fā)光相對強度。

激發(fā)光譜反映不同波長的光激發(fā)材料產(chǎn)生發(fā)光的效果。即表示發(fā)光的某一譜線或譜帶可以被什么波長的光激發(fā)、激發(fā)的本領(lǐng)是高還是低；也表示用不同波長的光激發(fā)材料時，使材料發(fā)出某一波長光的效率。熒光為光致發(fā)光，合適的激發(fā)光波長需根據(jù)激發(fā)光譜確定。激發(fā)光譜是在固定熒光波長下，測量熒光體的熒光強度隨激發(fā)波長變化的光譜。

（2）發(fā)射光譜

是指發(fā)光的能量按波長或頻率的分布。通常實驗測量的是發(fā)光的相對能量。發(fā)射光譜中，橫坐標(biāo)為波長，縱坐標(biāo)為發(fā)光相對強度。

（3）熒光強度與熒光物質(zhì)濃度的關(guān)系

用強度為I0的入射光，照射到液池內(nèi)的熒光物質(zhì)時，產(chǎn)生熒光，熒光強度If用儀器測得，在熒光濃度很稀（A《0.05）時，熒光物質(zhì)發(fā)射的熒光強度If與濃度有下面的關(guān)系：If=KC。

測試：

從150W氙燈光源發(fā)出的紫外和可見光經(jīng)過激發(fā)單色器分光后，再經(jīng)分束器 照到樣品表面，樣品受到該激發(fā)光照射后發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā)射單色器分光，再經(jīng)熒光端光電倍增管倍增后由探測器接收。另有一個光電倍增管位于監(jiān)測端，用以倍增激發(fā)單色器分出的經(jīng)分束后的激發(fā)光。

光源發(fā)出的紫外-可見光經(jīng)過激發(fā)單色器分光后，照到熒光池中的被測樣品上，樣品受到該激發(fā)光照射后 發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā)射單色器分光，由光電倍增管轉(zhuǎn)換成

相應(yīng)電信號，再經(jīng)放大器放大反饋進入A/D轉(zhuǎn)換單元，將模擬電信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)數(shù)字信號，并通過顯示器或打印機顯示和記錄被測樣品譜圖。

樣品制備：

1. 薄膜樣品

薄膜試樣可以直接在樣品臺上進行測試

2. 液體試樣

液體試樣應(yīng)放入專用的液體樣品槽中，固定到樣品座中。

測試過程：

1. 發(fā)射光譜的測試 第一步：參數(shù)設(shè)置。

（1） 設(shè)置光譜類型。選擇“Emission”發(fā)射光譜

（2） 設(shè)置激發(fā)波長。輸入激發(fā)波長

（3） 設(shè)置發(fā)光波長范圍。輸入掃描的起始波長和終止波長（對于未知樣，也可選擇可見光全波段400~760nm）

（4） 設(shè)置記錄范圍。輸入縱坐標(biāo)的最小和最大顯示值

（5） 設(shè)置掃描速度。

（6） 設(shè)置狹縫寬度。可分別選擇 激發(fā)和發(fā)射狹縫 寬度，對于發(fā)光較弱的樣品，測試時可以適當(dāng)增大狹縫寬度。

（7） 參數(shù)設(shè)置完成后，點擊“OK”。

光譜測試：

點擊屏幕右下角“Start”按鈕，開始發(fā)射光譜測試。測試完成后，保存數(shù)據(jù)。 注意：這種保存只是臨時保存，關(guān)機后將消失。永久保存需使用 File / Save as，選擇存儲路徑和文件夾，點擊“Save As”保存。保存后的文件，擴展名是“.SPC”，只能用測試軟件程序打開。若想將測試結(jié)果轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)，以利于使用其他軟件作圖和編輯，需進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換 2. 激發(fā)光譜的測試

基本操作同發(fā)射光譜，只是在設(shè)置光譜類型項選擇“Excitation”激發(fā)光譜。

樣品測試 ：

1． 數(shù)據(jù)記錄

測試熒光聚氨酯、熒光碳納米顆粒、熒光染料羅丹明B或羅丹明6G溶液的熒光和激發(fā)光譜，保存好所測試樣的發(fā)射和激發(fā)譜數(shù)據(jù)。

2． 數(shù)據(jù)處理和分析

利用Origin軟件將所得數(shù)據(jù)作圖，標(biāo)記最大激發(fā)波長和發(fā)射波長。
責(zé)任編輯：YYX