傳統(tǒng)的生物醫(yī)學(xué)研究主要依靠對(duì)細(xì)胞群的分析，這種分析方法只能簡(jiǎn)單地分析細(xì)胞集合的平均特性，而無(wú)法捕捉細(xì)胞群之間的異質(zhì)性。近年來(lái)，人們?cè)絹?lái)越認(rèn)識(shí)到在單個(gè)細(xì)胞水平上研究生物樣本的重要性和意義，細(xì)胞群的同質(zhì)性假設(shè)受到了挑戰(zhàn)。為此，人們開(kāi)發(fā)了適當(dāng)?shù)墓ぞ邅?lái)研究組織內(nèi)單個(gè)細(xì)胞之間存在的異質(zhì)性和多樣性。

液滴微流控技術(shù)在單細(xì)胞測(cè)序、細(xì)胞系追蹤、檢測(cè)開(kāi)發(fā)、藥物篩選以及稀有細(xì)胞分析等方面具有巨大潛力。

然而，傳統(tǒng)液滴微流控器件中的單細(xì)胞封裝率在很大程度上受到水相中初始細(xì)胞密度和微通道幾何形狀的影響。在隨機(jī)封裝中，細(xì)胞在水相中隨機(jī)分布，根據(jù)泊松分布理論，最多只有37%的液滴能夠封裝單個(gè)細(xì)胞。這種低概率導(dǎo)致樣品和液滴材料的大量浪費(fèi)。因此，為解決這個(gè)問(wèn)題，通常選擇螺旋微流控技術(shù)將細(xì)胞集中到等間距的單線上，使單細(xì)胞按順序進(jìn)入液滴。例如，Park等人采用寬度為140 μm的五環(huán)螺旋通道將15 μm的微珠聚焦成一條線，當(dāng) λ = 0.8 時(shí)，單個(gè)微珠的封裝率達(dá)到約60%（λ為每個(gè)液滴中細(xì)胞/微珠的平均數(shù)量，λ = （細(xì)胞/微珠懸浮密度）×（液滴體積））。雖然理論上較高的細(xì)胞密度可以提高封裝率，但將懸浮液密度提高一倍至λ = 1.6并沒(méi)有顯著提高單珠封裝率（65%）。這一結(jié)果可能是由于在流動(dòng)條件下，螺旋通道在高濃度樣品上的性能會(huì)因相互影響而下降。相比之下，Kemna等人采用類似的五環(huán)螺旋通道實(shí)現(xiàn)了較高的單細(xì)胞液滴封裝率（77%）。比較這兩項(xiàng)研究可以發(fā)現(xiàn)，較高的細(xì)胞密度（λ = 1.1）和較窄的螺旋通道（50 μm）可以導(dǎo)致較高的單細(xì)胞封裝率。同時(shí)，窄螺旋通道可能有助于提高細(xì)胞的密度，但窄螺旋通道也可能導(dǎo)致堵塞。對(duì)于一組給定的參數(shù)，如初始細(xì)胞密度、容積流速、通道高度和寬度，成功的單細(xì)胞封裝總是面臨著聚焦效率和封裝率之間的內(nèi)在權(quán)衡。液滴的形成和每個(gè)液滴的封裝細(xì)胞數(shù)對(duì)這些參數(shù)極為敏感。

據(jù)麥姆斯咨詢報(bào)道，近期，來(lái)自新加坡國(guó)立大學(xué)（National University of Singapore）的研究人員提出了一種新型液滴微流控器件（圖1），該器件集成了雙螺旋聚焦單元和片上樣品富集模塊，可實(shí)現(xiàn)高通量單細(xì)胞封裝。在液滴封裝之前進(jìn)行片上樣品富集，可避免細(xì)胞密度過(guò)高而堵塞狹窄通道的風(fēng)險(xiǎn)。

研究人員還發(fā)現(xiàn)，使用較低的初始細(xì)胞密度可減少細(xì)胞間的相互作用，從而大大促進(jìn)細(xì)胞聚焦和單細(xì)胞封裝。基于流動(dòng)阻力的樣品富集模塊可在細(xì)胞聚焦后通過(guò)去除多余的水相調(diào)整細(xì)胞密度。水相的去除量可通過(guò)改變蛇形單元的數(shù)量來(lái)控制，而蛇形單元的數(shù)量則由PDMS芯片打孔器決定。低密度樣品和更大的通道提高了聚焦效率，降低了流動(dòng)剪切應(yīng)力，并減少了堵塞的可能性。這種新型微流控器件大大提高了油包水液滴中單細(xì)胞封裝參數(shù)選擇的靈活性。相關(guān)研究成果以“Enhancing single-cell encapsulation in droplet microfluidics with fine-tunable on-chip sample enrichment”為題發(fā)表在microsystems & nanoengineering期刊上。

圖1 用于單細(xì)胞封裝的液滴微流控平臺(tái)示意圖

研究人員設(shè)計(jì)的微流控平臺(tái)共有三個(gè)單元：（1）帶有等距支柱的8環(huán)雙螺旋聚焦單元。其中，螺旋通道寬度為100 μm，最內(nèi)圈的曲率半徑為333 μm，最外圈的曲率半徑為3800 μm。該裝置中的支柱呈70 μm半圓形，每隔1/6 圈（30°）放置在環(huán)形通道內(nèi)側(cè)。（2）基于流動(dòng)阻力的樣品富集模塊。該模塊由5個(gè)相同的蛇形單元組成，每個(gè)單元長(zhǎng)700 μm，寬100 μm，每個(gè)蛇形單元之間的間距為700 μm。（3）液滴生成單元，采用傳統(tǒng)的交叉流結(jié)構(gòu)。

在該微流控平臺(tái)的設(shè)計(jì)中，樣品聚焦是防止樣品在去除多余水分時(shí)流失的重要步驟。研究人員利用螺旋通道進(jìn)行聚焦，將所有樣品依次導(dǎo)入液滴生成單元。雖然聲學(xué)等主動(dòng)聚焦技術(shù)（也能實(shí)現(xiàn)高效的片上細(xì)胞聚焦）也可能適用于該微流控系統(tǒng)，但目前的設(shè)計(jì)是一種簡(jiǎn)單、集成的片上富集工具，無(wú)需在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行額外的富集步驟。

此外，通過(guò)整合樣品富集模塊，該研究實(shí)現(xiàn)了較高的單細(xì)胞封裝率：15 μm微珠的封裝率為79.2%，MDA-MB-231細(xì)胞（約14 μm）的封裝率為 72.2%。這種高水平的性能在不同直徑的微珠或細(xì)胞中都得以保持。在沒(méi)有樣品富集模塊的情況下，微珠的富集率降至24.2%。造成這一巨大差異的部分原因可能是流速。去掉50%的水后，樣品懸浮液可以以更高的流速泵送（即80 μL/min ），而沒(méi)有樣品富集模塊時(shí)，流速必須限制在40 μL/min 。眾所周知，較高的流速會(huì)對(duì)樣品產(chǎn)生較大的推力，減少樣品在輸送過(guò)程中的沉降。

圖2 使用15 μm聚苯乙烯微珠的微流控芯片在三種不同流速下的軌跡聚焦和樣品富集性能

圖3 15 μm聚苯乙烯微珠的液滴封裝

圖4 三種不同流速下微流控芯片上細(xì)胞（MDA-MB-231）的軌跡聚焦和樣品富集性能

總之，本研究成功地展示了將片上樣品富集模塊集成到液滴微流控平臺(tái)的優(yōu)勢(shì)，從而為各種應(yīng)用提供了一種用途更廣、更靈活的設(shè)計(jì)思路。未來(lái)研究的重點(diǎn)可能是改進(jìn)液滴微流控器件的設(shè)計(jì)，以進(jìn)一步提高聚焦性能和樣品富集效率。這樣的進(jìn)步將能更精確地控制單個(gè)或多個(gè)微珠或細(xì)胞的封裝率，并進(jìn)一步擴(kuò)大這一多功能平臺(tái)的應(yīng)用范圍。



審核編輯：劉清