生物界面在近年來的突破性研究大大推動了可穿戴設備的發展，這對于監測和實時了解個人健康意義重大。作為一種可穿戴模塊，微針可以以微創方式從皮膚組織間質液中提取人們感興趣的分析物進行研究。然而，目前來說，利用微針對大分子生物標記物同時進行高效提取和實時監測還非常困難。 有鑒于此，復旦大學方雪恩副研究員和孔繼烈教授等人展示了一種CRISPR激活的石墨烯生物界面的協同效應，并基于此提出了一種用于提取和體內長期監測游離DNA（cell-free DNA，cfDNA）的即時在線（on-line）可穿戴微針貼片。該可穿戴微針貼片能夠實時監測Epstein-Barr病毒、敗血癥和腎移植游離DNA，具有60%胎牛血清的抗干擾能力，在體內展現出長達10天的穩定靈敏度。對免疫缺陷小鼠模型的實驗結果表明了該方法的可行性和實用性，有望長期在體內監測游離DNA，并用于早期疾病篩查和預后。相關工作以“Programmable CRISPR-Cas9 microneedle patch for long-term capture and real-time monitoring of universal cell-free DNA”為題發表在Nature Communications。

如圖1所示，為了實現對目標DNA的實時監測，可穿戴微針貼片系統由噴涂功能柔性貼片和三電極導電微針（MN）組成。首先，研究人員用等離子體處理PDMS膜的表面，以增加膜的親水性。然后，通過滴注1%殼聚糖溶液在PDMS膜上制備親水膜。由于PDMS的柔軟特性和弱表面附著力，在彎曲、拉伸和扭轉過程中，滲濾微觀結構會進行界面形變。受此啟發，研究人員隨后將碳納米管沉積在改性的PDMS膜上，所形成的碳納米管圖案可充當反向離子導入室，分離帶負電的化合物（例如核酸或抗壞血酸）。最后，將導電CRISPR微針陣列作為工作電極連接到CNT圖案的陽極側。這種CRISPR MN在實時檢測中具有三種功能：（I）插入表皮以分離和富集靶標DNA；（II）由固定在CRISPR MNs表面的Cas9/sRNA特異性地進行CRISPR基因編輯；（III）所形成三電極系統用以記錄電信號。

圖1CRISPR-Cas9活化的石墨烯生物界面用于提取和實時監測cfDNA 接著，研究人員進一步闡述了該可穿戴貼片的實時監測能力：（I）在該CRISPR微針系統中，由Cas9酶所形成的Cas9/sgRNA（dRNP）可作為持續搜索和識別目標DNA的驅動力；（II）MNs上的石墨烯生物界面則提供了高效的荷電化合物相互作用和電子傳輸。石墨烯表面的dRNP與CRISPR基因編輯靶標的雜交不僅改變了石墨烯界面通道的電導率，而且導致反離子積累。因此，在石墨烯表面生成了離子滲透層以保持電荷中性。本體溶液和離子滲透層之間的離子濃度差異則產生了Donnan電位。因此，記錄的輸出電信號可以反映對目標cfDNA的實時識別情況（圖2）。基于上述方法，該CRISPR微針系統可成功實時監測Epstein-Barr病毒、敗血癥和腎移植cfDNA，并有望進一步擴展應用于其他cfDNA衍生疾病的長期實時監測和早期診斷。

圖2CRISPR MN可穿戴系統在小鼠上演示功能 論文鏈接： https://doi.org/10.1038/s41467-022-31740-3

審核編輯 ：李倩