吉林大學賴良學教授和李占軍教授課題組長期致力于利用新型基因編輯技術構建大動物模型，主要包括家兔和豬。

最近，該課題組開發了對CC context的高特異性新型APOBEC3G-nCas9堿基編輯器，相關研究成果于2020年8月31日在線發表于BMC Biology‘ ，題為Precise base editing with CC context-specificity using engineered human APOBEC3G-nCas9 fusions[1]。

圖1.eA3G-BE堿基編輯器具有CCcontext偏好性

傳統的單堿基編輯系統（rA1-BE）由于所用的大鼠胞嘧啶脫氨酶窗口較大，其對多個C位點的編輯精確性仍有待提高。基于人APOBEC3G（hA3G）具有天然的CCcontext偏好性，研究者將hA3G的C端催化結構域與單堿基系統融合，構建了新型eA3G-BE堿基編輯系統。該系統在HEK293T細胞和家兔胚胎中分別獲得了高達18.3–58.0% 和54.5–92.2%的編輯效率。與傳統的rA1-BE相比，eA3G-BE表現出明顯的CCC>CCC>CC的序列偏好性，從而顯著減少了對非CCcontext的旁觀者突變（圖1）。同時，研究者將eA3G-BE與SpCas9-NG融合，獲得了eA3G-NG系統，將可打靶范圍進一步擴大到NGNPAM。

圖2.利用eA3G-BEs在家兔中實現高效CCcontext堿基編輯

進一步，研究者利用eA3G-BE和eA3G-NG對CC context的偏好性，針對傳統的rA1-BE難以精確實現的堿基突變位點，在家兔中成功精確模擬了人肌萎縮側索硬化癥Tia1 p.P362L，阿爾茲海默癥Psen1p.P117L和Maptp.P301L等典型的臨床錯義突變位點。此外，利用該系統成功構建了白化病疾病模型兔，顯著提高了堿基編輯的精確性（圖2）。該新型A3G-BE堿基編輯系統在家兔中的高效應用，為相關疾病的發病機制及臨床前研究提供理想的疾病動物模型。

值得一提的是，最近來自中國農業科學院和美國萊斯大學的研究人員也開發了相似的堿基編輯器[2]，進一步佐證了新型APOBEC3G-nCas9堿基編輯器的精確性和應用價值。