開(kāi)發(fā)有效、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和調(diào)節(jié)生物對(duì)象內(nèi)部環(huán)境的技術(shù)對(duì)于許多生物醫(yī)學(xué)工程和科學(xué)應(yīng)用，包括藥物輸送、電生理記錄和細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)的調(diào)節(jié)，具有重要意義。半植入式生物電子是當(dāng)前生物醫(yī)學(xué)工程研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)，因?yàn)樗粌H滿足了對(duì)生物活動(dòng)進(jìn)行精確檢測(cè)或調(diào)節(jié)的日益增長(zhǎng)的技術(shù)需求，而且為外部整合復(fù)雜功能和電子集成提供了一個(gè)理想的平臺(tái)。盡管與廣受好評(píng)的無(wú)創(chuàng)生物電子和完全植入式生物電子相比，半植入式生物電子的定義和總結(jié)較少，但它已成為推動(dòng)生物芯片和智能可穿戴設(shè)備發(fā)展的高度獨(dú)特的技術(shù)。

中山大學(xué)謝曦教授等于Nano-Micro Letters期刊發(fā)表了題為“Semi-Implantable Bioelectronics”的綜述文章，提出了“半植入式生物電子”的概念，總結(jié)了半植入式電子在細(xì)胞應(yīng)用和體內(nèi)應(yīng)用的原理和策略，討論了進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)環(huán)境或體內(nèi)環(huán)境的典型方法、生物安全方面和典型應(yīng)用，對(duì)于深入理解設(shè)計(jì)原則、材料制造技術(shù)、設(shè)備集成工藝、細(xì)胞/組織滲透方法、生物安全方面以及對(duì)未來(lái)微創(chuàng)生物電子發(fā)展至關(guān)重要的應(yīng)用策略具有重要意義。“半植入式生物電子”，指的是可以進(jìn)入生物對(duì)象（如細(xì)胞、組織或動(dòng)物/人體）內(nèi)部環(huán)境的功能或電子裝置，而連接的散裝裝置仍保留在生物對(duì)象的表面。與其他生物電子（如可穿戴生物電子或完全植入式生物電子）相比，半植入式生物電子建立了一個(gè)平臺(tái)，可以精確檢測(cè)或調(diào)節(jié)生物對(duì)象內(nèi)部的生物活動(dòng)，并通過(guò)電子集成實(shí)現(xiàn)外部整合功能。

圖文導(dǎo)讀

1.用于探測(cè)單個(gè)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的半植入式單納米線結(jié)構(gòu)

近幾十年來(lái)，通過(guò)先進(jìn)的微/納米制造技術(shù)，出現(xiàn)了大量納米設(shè)備，以便于以半植入方式進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)區(qū)域。尤其是一維納米結(jié)構(gòu)（例如，納米線、納米線、納米管、納米柱）能夠穿透細(xì)胞通過(guò)其尖銳納米尖端的局部高壓形成的薄膜，如圖1所示。原子力顯微鏡（AFM）或微操作器是協(xié)助單納米探針設(shè)備（如納米線）記錄和調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)的常用工具。在單細(xì)胞中進(jìn)行高時(shí)空分辨率的傳感和操作對(duì)于探索細(xì)胞微/納米環(huán)境、檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)生化指標(biāo)以及以亞細(xì)胞/納米尺度揭示細(xì)胞間差異具有重要意義。

圖1 （a）（i）-（ii）同軸AFM探針的SEM圖像。（iii）使用DENT提取的單細(xì)胞mRNA的操作。（iv）圖中表示β-肌動(dòng)蛋白mRNA的場(chǎng)開(kāi)和場(chǎng)關(guān)。（v）檢測(cè)GAPDH和HPRT。（b）（i）-（ii）一個(gè)現(xiàn)成的裝置和一個(gè)順式結(jié)構(gòu)的雙重扭結(jié)納米線的SEM圖像。（iii）從心肌細(xì)胞單層記錄的示意圖。（iv）從跳動(dòng)的心肌細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)的電記錄。（v）穩(wěn)態(tài)的細(xì)胞內(nèi)記錄。（c）（i）硅納米線上的納米管的SEM圖像。（ii）-（iii）反映細(xì)胞外記錄的代表性痕跡。（iv）細(xì)胞內(nèi)記錄的峰值的放大圖。（v）同時(shí)記錄兩個(gè)裝置的細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)的電信號(hào)。（d）（i）-（ii）細(xì)胞內(nèi)窺鏡與玻璃移液器的比較。（iii）HeLa細(xì)胞（左）被玻璃移液器詢(xún)問(wèn)，原代大鼠肝細(xì)胞核被納米管內(nèi)窺鏡詢(xún)問(wèn)。（iv）-（v）分別裝有100和50nm碳納米管尖端的內(nèi)窺鏡的SEM圖像。（vi）帶有碳納米管尖端的玻璃吸管的光學(xué)圖像。

2.用于同時(shí)探測(cè)多個(gè)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的半植入式納米線陣列

因?yàn)閱渭{米線器件吞吐量較低難以對(duì)許多單個(gè)細(xì)胞同步執(zhí)行操作的特點(diǎn)，所以單納米線器件的廣泛應(yīng)用受到阻礙。為了解決這一限制，垂直排列的納米線陣列為大規(guī)模和高通量的細(xì)胞提供了一個(gè)獨(dú)特的平臺(tái)，甚至可以進(jìn)行單細(xì)胞操作。基于尖銳納米尖端處的細(xì)胞力，細(xì)胞納米結(jié)構(gòu)界面可以自發(fā)地在細(xì)胞膜上形成局部更高的張力。在實(shí)際應(yīng)用中，垂直納米線器件甚至可以基于其3D銳利的特性穿透細(xì)胞膜。

圖2 （a）（i）硅納米線陣列的SEM圖像。（ii）熒光圖像顯示納米線陣列+TENG、平坦+TENG和納米線陣列經(jīng)10kD葡聚糖-FITC輸送處理后的組織切片。（b）BNS陣列的SEM圖像，以及用BNS陣列構(gòu)建的電穿孔系統(tǒng)捕獲癌細(xì)胞后的細(xì)胞輸送和原位提取示意圖。（c）VNEA的SEM圖像和大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元在其上培養(yǎng)后的DIC顯微照片。行動(dòng)電位是用貼片吸管（藍(lán)色）刺激的，并由VNEA墊在Faradaic模式（品紅色）下記錄。

3.基于半植入式納米器件的誘發(fā)細(xì)胞膜穿透方法

為了提高穿透效率，人們開(kāi)發(fā)了其他輔助策略，如電穿孔、光修復(fù)、化學(xué)涂層或機(jī)械力來(lái)提高細(xì)胞穿透。許多工作已經(jīng)證明，脂質(zhì)膜可以通過(guò)應(yīng)用外力（如力、電和光）以及化學(xué)制劑與垂直納米線裝置耦合而被滲透。耦合外力進(jìn)行細(xì)胞滲透的三種主要輔助策略擁有各自的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)。電穿孔耦合可以導(dǎo)致細(xì)胞膜上納米孔的誘導(dǎo)，但可能會(huì)破壞細(xì)胞活動(dòng)，而且納米孔的重新封閉會(huì)妨礙長(zhǎng)期記錄。用垂直納米線進(jìn)行光化耦合可以防止電干擾的缺陷，但存在低通量調(diào)節(jié)的問(wèn)題。用納米線在細(xì)胞上施加外部機(jī)械力似乎是增加膜滲透的直接方法，但滲透效率相對(duì)低于電穿孔或光穿孔方法。

圖3 （a）（i）在電穿孔之前，記錄的動(dòng)作電位顯示細(xì)胞外信號(hào)。電穿孔后，細(xì)胞內(nèi)信號(hào)振幅增加100倍以上。（ii）納米柱電極電穿孔細(xì)胞膜的示意圖。（b）U-NWFET探針的細(xì)胞內(nèi)記錄圖。（i）一種內(nèi)部化的短溝道U-NWFET，在細(xì)胞膜上具有高電阻密封，用于高振幅記錄。（ii）部分封閉/內(nèi)化的U-NWFET具有更長(zhǎng)的通道長(zhǎng)度/ROC，導(dǎo)致較弱的細(xì)胞內(nèi)樣動(dòng)作電位記錄。（c）用3D納米電極在MEA上培養(yǎng)的神經(jīng)元。3D納米電極記錄細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)，而其他電極記錄細(xì)胞外信號(hào)。

4.半植入式納米線器件的細(xì)胞安全性

基于半植入式納米線的器件以精確的空間分辨率和低擾動(dòng)的方式被廣泛用作細(xì)胞的調(diào)節(jié)工具。最初，評(píng)估納米線裝置對(duì)細(xì)胞擾動(dòng)的主要指標(biāo)是慢性細(xì)胞活力和細(xì)胞膜完整性。通過(guò)在體外用不同的納米線材料培養(yǎng)不同類(lèi)型的細(xì)胞來(lái)評(píng)估半植入式納米線裝置的安全性。

圖4 （a）不同NW密度的Si-NW陣列上培養(yǎng)的肝細(xì)胞的形態(tài)和擴(kuò)散。比例尺：10μm。（b）五個(gè)管家基因的相對(duì)mRNA表達(dá)分析表明，與正常培養(yǎng)條件下的細(xì)胞相比，NWs刺穿的細(xì)胞功能受到的干擾最小。

5.半植入式納米線器件用于細(xì)胞內(nèi)外的分子傳遞

細(xì)胞內(nèi)分子向單個(gè)靶細(xì)胞的傳遞對(duì)于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的個(gè)性化醫(yī)學(xué)的診斷和治療具有重要意義。在過(guò)去的十年中，體細(xì)胞電穿孔技術(shù)通常用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，但由于分辨率低和對(duì)高壓電源的要求，導(dǎo)致體細(xì)胞電穿孔的分子傳遞不穩(wěn)定。與傳統(tǒng)的整體電穿孔相比，納米電穿孔可以在細(xì)胞上提供高度本地化和精確的電穿孔，從而顯著提高穿孔效率和細(xì)胞活力（圖5a）。理論上，納米線電穿孔效應(yīng)通常發(fā)生在細(xì)胞-納米界面的頂端，由于細(xì)胞膜與納米結(jié)構(gòu)的良好耦合，在這里低電壓足以達(dá)到細(xì)胞膜穿孔的臨界條件。

圖5 （a）（i）用于單細(xì)胞電穿孔的NFP芯片的光學(xué)圖像和NEP尖端的SEM圖像。（ii）用NFP探針將葡聚糖Alexa-Fluor488轉(zhuǎn)染到靶HeLa細(xì)胞的光學(xué)圖像和轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞的熒光圖像。（b）nanostraw-質(zhì)膜界面之間的緊密接觸允許高效轉(zhuǎn)染pRFP。（c）mRNA轉(zhuǎn)染不同的原代細(xì)胞類(lèi)型。

6.半植入式納米線器件用于細(xì)胞內(nèi)的生物化學(xué)傳感

為了對(duì)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)態(tài)和生物相容性記錄，半植入式納米線被開(kāi)發(fā)為細(xì)胞內(nèi)生物傳感工具，旨在基于其獨(dú)特的細(xì)胞穿透能力精確測(cè)量細(xì)胞內(nèi)生物標(biāo)記物。與傳統(tǒng)的細(xì)胞裂解相比，納米設(shè)備可以以定量和靈敏的方式直接檢測(cè)生物標(biāo)記物，無(wú)需大型分析儀器。此外，半植入式納米器件能夠從細(xì)胞內(nèi)內(nèi)容物中重復(fù)提取，并實(shí)現(xiàn)高通量并行傳感。

圖6 （a）通過(guò)RNA分析檢查的納米活檢示意圖和納米微管尖端的SEM圖像。（b）（i）電化學(xué)注射器以半自動(dòng)方式移動(dòng)到目標(biāo)位置以收集含有細(xì)胞質(zhì)的mRNA并通過(guò)qPCR檢測(cè)其的示意圖。（ii）收集過(guò)程的SICM圖像。（iii）每個(gè)位點(diǎn)mRNA表達(dá)水平的統(tǒng)計(jì)分析。（c）（i）示意圖（小橙色圓圈代表囊泡）和ananotip錐形碳纖維電極視圖。（ii）囊泡在原位電極上的吸附和開(kāi)放機(jī)理。（iii）ananotip錐形碳纖維電解拋光的安培描記法。（d）（i）將交流電壓應(yīng)用于納米除草器以定向捕獲溶液中或細(xì)胞內(nèi)分子的示意圖，以及DEP納米除草器的TEM圖像。（ii）提取DNA的平均qPCR擴(kuò)增和典型熔融曲線。（e）無(wú)損納米移液管細(xì)胞內(nèi)取樣系統(tǒng)允許通過(guò)電穿孔從培養(yǎng)在150nm聚合物膜上的細(xì)胞中提取內(nèi)容物，并通過(guò)熒光、ELISA或qPCR進(jìn)行分析。NS的SEM圖像（右下角）。

7.半植入式納米線器件用于細(xì)胞內(nèi)電生理記錄

作為金標(biāo)準(zhǔn)電生理技術(shù)，膜片鉗通過(guò)吸入細(xì)胞膜與細(xì)胞內(nèi)環(huán)境形成耦合界面，提供高質(zhì)量動(dòng)作電位記錄。然而，這種侵入性工作模式很難用于長(zhǎng)期和高通量記錄。膜片鉗的微尖玻璃微移液管對(duì)于大小相似的細(xì)胞來(lái)說(shuō)相對(duì)較大，這會(huì)對(duì)細(xì)胞造成較大的損傷。為了解決這個(gè)缺點(diǎn)，多電極陣列可以在網(wǎng)絡(luò)中長(zhǎng)期記錄來(lái)自多個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞外信號(hào)。然而，由于電極與細(xì)胞的弱耦合，細(xì)胞外記錄的信號(hào)質(zhì)量受到限制，很少能夠反映動(dòng)作電位的詳細(xì)信息。為了克服這些限制，納米級(jí)設(shè)備已經(jīng)出現(xiàn)，可以以微創(chuàng)的方式對(duì)細(xì)胞內(nèi)電信號(hào)進(jìn)行高通量記錄。納米電極平臺(tái)可以提供高質(zhì)量和長(zhǎng)期的細(xì)胞內(nèi)記錄，適用于神經(jīng)科學(xué)和心臟病學(xué)中大量可興奮細(xì)胞的記錄。

圖7 （a）CNP電生理實(shí)驗(yàn)裝置和CNP與細(xì)胞膜之間界面的示意圖（左）。CNP尖端的SEM圖像（右）。（b）（i）左：通過(guò)獨(dú)立扭結(jié)的納米線晶體管探針從靶細(xì)胞記錄細(xì)胞內(nèi)電信號(hào)的示意圖。右圖：扭曲納米線探針和膜片夾吸管的差分干涉對(duì)比圖像。比例尺：5μm（ii）使用雙扭結(jié)納米線探針記錄來(lái)自?xún)蓚€(gè)相鄰心肌細(xì)胞的復(fù)合IC AP。（c）（i）-（ii）CMOS制造和組裝的圖像。每個(gè)晶圓包含256個(gè)集成電路。（iii）在電穿孔之前，細(xì)胞外動(dòng)作電位圖顯示了均勻的信號(hào)傳播。電穿孔后，標(biāo)測(cè)顯示細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)速度和螺旋重入行為顯著降低。（d）（i）CNEI陣列上培養(yǎng)神經(jīng)元的偽彩色圖譜。（ii）CNEI陣列上兩次爆發(fā)的細(xì)胞內(nèi)記錄顯示同步放電。（iii）另一系列細(xì)胞內(nèi)記錄于19?連續(xù)刺激記錄的最小值，細(xì)胞內(nèi)耦合的總像素?cái)?shù)為1728。

8.用于生物體的半植入式經(jīng)皮裝置

對(duì)于生物醫(yī)學(xué)診斷，血液中的許多指標(biāo)反映了健康狀況。例如，血糖水平反映了胰腺的健康狀況，膽固醇和甘油三酯水平反映了心血管的健康狀況，而蛋白質(zhì)水平則反映了其他器官的健康狀況。透皮裝置是檢測(cè)或調(diào)節(jié)皮下組織生化活性的有效工具，典型的例子有連續(xù)葡萄糖監(jiān)測(cè)（CGM）、葡萄糖微透析探針、基于CGM的閉環(huán)胰島素輸送系統(tǒng)和血液透析循環(huán)系統(tǒng)。迄今為止，基于酶的葡萄糖濃度電化學(xué)檢測(cè)的CGM是最成功的透皮裝置技術(shù)之一，并已商業(yè)化用于臨床應(yīng)用，如圖8所示。

圖8 代表性透皮半植入式裝置。（a）經(jīng)皮電化學(xué)葡萄糖生物傳感器的結(jié)構(gòu)和原理。（b）基于CGM的閉環(huán)胰島素泵系統(tǒng)。（c）用于葡萄糖監(jiān)測(cè)的微透析探針。（d）血液透析系統(tǒng)。

9.用于生物體半植入式藥物輸送微針裝置

微針技術(shù)是一種新型透皮裝置，具有500-800μm長(zhǎng)的針頭陣列，能夠以無(wú)痛和微創(chuàng)的方式穿透皮下皮膚層。短微針旨在穿透皮膚最外層的角質(zhì)層，但不觸及真皮層的神經(jīng)末梢或毛細(xì)血管，從而以無(wú)痛的方式穿透皮膚。此外，微針技術(shù)降低了訓(xùn)練有素的醫(yī)務(wù)人員的操作復(fù)雜性，使其成為非專(zhuān)業(yè)人員的便捷工具。此外，微創(chuàng)和原位功能有效避免了血液提取，減少了血液感染、樣品污染等不希望出現(xiàn)的問(wèn)題，為透皮應(yīng)用鋪平了一條便捷的替代途徑。結(jié)合完善的便攜式檢測(cè)或輸送系統(tǒng)，患者可以執(zhí)行檢測(cè)任務(wù)，而無(wú)需擔(dān)心或擔(dān)心金屬針造成的組織損傷或感染風(fēng)險(xiǎn)。藥物、疫苗或診斷劑的經(jīng)皮給藥無(wú)疑是過(guò)去十年中微針技術(shù)最重要的應(yīng)用。如圖9所示，微針的物理形式?jīng)Q定了藥物輸送的策略。

圖9 （a）微針透皮給藥策略：A各種類(lèi)型的微針應(yīng)用于皮膚，B相應(yīng)的給藥方法。（b-e）不同物理形態(tài)微針的SEM圖像，包括（b）固體金屬微針，（c）可溶性聚合物微針，（d）空心微針和（e）帶槽微針（左：頂視圖，右：側(cè)視圖）。比例尺：100μm。

10.用于生物體的水溶性或可生物降解的半植入式微針裝置

近年來(lái)，水溶性或可生物降解的微針因其制備方便和治療疾病的多功能性而成為研究最多的類(lèi)別。通過(guò)可生物降解的微針進(jìn)行皮下胰島素輸送是另一個(gè)熱點(diǎn)，因?yàn)樗鼈兛梢詾榈鞍踪|(zhì)藥物提供必要的連續(xù)輸送。避免全身副作用的局部治療是微針給藥的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)。這一優(yōu)勢(shì)還為具有全身毒性和副作用的抗腫瘤藥物提供了一種有前景的劑型。另一方面，皮下組織中的毛細(xì)血管可以使小分子藥物從真皮快速擴(kuò)散到體循環(huán)，為自我管理的心血管疾病治療提供了新的機(jī)會(huì)。

圖10 用于皮下組織輸送的水溶性或可生物降解微針。（a）與傳統(tǒng)的肌內(nèi)免疫免疫相比，可溶性微針可傳遞滅活流感病毒并實(shí)現(xiàn)有效的免疫接種。（b）微針接種和NAFL治療的聯(lián)合使用導(dǎo)致無(wú)損傷接種和擴(kuò)大交叉保護(hù)免疫。（c）用于延長(zhǎng)胰島素釋放的可膨脹微針。（d）使用明膠復(fù)合物微針緩慢釋放藥物，在糖尿病大鼠中顯示出比皮下注射更長(zhǎng)的降糖效果。（e）通過(guò)可溶性MNs傳遞CGRP拮抗肽治療局部神經(jīng)病理性疼痛的示意圖。（f）載順鉑微針用于安全有效的抗腫瘤治療。（g）可生物降解微針，用于通過(guò)可生物降解微針聯(lián)合傳遞SNP和硫代硫酸鈉，用于控制副作用的抗高血壓治療。

11.用于藥物按需釋放于生物體內(nèi)的半植入式微針裝置

基于微納制造技術(shù)，微針可以與其他先進(jìn)技術(shù)相結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)更復(fù)雜的功能，例如按需藥物釋放。Wei等人將導(dǎo)電微針電極與電穿孔裝置相結(jié)合，用于在安全電壓下進(jìn)行體內(nèi)DNA和siRNA傳遞，在小鼠模型中實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒DNA（在健康肌肉組織中）和siRNA（進(jìn)入腫瘤）的高效和局部傳遞（圖11a）。陳的團(tuán)隊(duì)將光熱轉(zhuǎn)換納米材料（LaB6）和化療藥物分子封裝在熔點(diǎn)較低（~60℃）的聚己內(nèi)酯微針中，以建立近紅外（NIR）光觸發(fā)透皮控釋系統(tǒng)，這種微針系統(tǒng)顯示出良好的協(xié)同效應(yīng)，在小鼠模型上1周內(nèi)根除4T1腫瘤，無(wú)復(fù)發(fā)和顯著體重減輕（圖11b）。Gu的團(tuán)隊(duì)將精心設(shè)計(jì)的葡萄糖反應(yīng)性囊泡或基質(zhì)與胰島素整合到可膨脹的微針中，以建立閉環(huán)胰島素輸送系統(tǒng)。這些系統(tǒng)證明了胰島素缺乏型糖尿病小鼠和小型豬模型的血糖調(diào)節(jié)有效性（圖11c-d）。

圖11 基于微針的按需藥物釋放療法。（a）左：用于電穿孔的導(dǎo)電微針陣列叉指電極。右圖：微針電穿孔處理有效增強(qiáng)了pmRFP-C1（RFP）質(zhì)粒的表達(dá)（區(qū)域3）。（b）用于小鼠腫瘤模型化療和光熱治療的近紅外（NIR）光觸發(fā)經(jīng)皮控釋微針示意圖。（c）葡萄糖反應(yīng)性微針（GR MNs）葡萄糖觸發(fā)胰島素釋放的圖示以及GR MNs在糖尿病小型豬模型上的應(yīng)用。（d）有效快速調(diào)節(jié)胰島素缺乏型糖尿病小鼠（上）和小型豬（下）的血糖水平（PGL）。藍(lán)色箭頭：微針注射的時(shí)間點(diǎn)。粉紅色箭頭：喂食的時(shí)間點(diǎn)。

12.用于生物體的可穿戴式的半植入微針裝置

微針技術(shù)作為一種強(qiáng)大的透皮給藥平臺(tái)，通過(guò)與可穿戴生物傳感系統(tǒng)的結(jié)合，為集成診斷和治療系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)提供了令人興奮的新可能性。Kim的團(tuán)隊(duì)報(bào)告了關(guān)于閉環(huán)糖尿病監(jiān)測(cè)和治療的代表性研究（圖12a-b）。事實(shí)上，近年來(lái)，基于微針的生物傳感技術(shù)取得了令人樂(lè)觀的進(jìn)展。用導(dǎo)電或半導(dǎo)體材料制作微針作為透皮傳感電極矩陣，并通過(guò)三電極電化學(xué)或生物阻抗測(cè)量進(jìn)行傳感，是基于微針的生物傳感的基本原理（圖12c）。除了固體微針之外，空心微針還可以提供生物傳感的技術(shù)策略，利用微針針尖內(nèi)的微通道將真皮或內(nèi)皮中的間質(zhì)液體（ISF）轉(zhuǎn)移到體外分析（圖12d）或通過(guò)完全集成的微針生物傳感器進(jìn)行設(shè)備監(jiān)測(cè)（圖12e）。

圖12 使用微針控制藥物輸送的集成診斷和治療系統(tǒng)。（a）可伸縮皮膚安裝閉環(huán)糖尿病監(jiān)測(cè)和治療設(shè)備的示意圖和相應(yīng)照片，包括汗液葡萄糖傳感模塊（左）和電熱觸發(fā)治療微針貼片（右），廣泛使用GP混合材料。熱響應(yīng)微針的控釋機(jī)制（左）及其溫度依賴(lài)性如（b）所示。（c）通過(guò)在體內(nèi)給糖尿病小鼠注射二甲雙胍，這種微針治療可顯著抑制血糖。（d）兩級(jí)熱觸發(fā)治療微針的示意圖和顯微照片。（e）在不同劑量控制的微針治療下，微針的兩階段釋放曲線（左）和對(duì)糖尿病小鼠的血糖抑制作用。

13.用于微創(chuàng)/無(wú)創(chuàng)檢測(cè)葡萄糖含量的微針生物傳感器

微針CGM傳感器可以為糖尿病患者提供無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)體驗(yàn)，而不是頻繁的手指棒測(cè)量造成的疼痛和不便，或商業(yè)CGM設(shè)備的長(zhǎng)金屬探針（幾毫米）引起的炎癥風(fēng)險(xiǎn)。圖13展示了幾種用于葡萄糖傳感的電化學(xué)工作電極的代表性設(shè)計(jì)，高度線性，幾乎覆蓋了糖尿病患者的大部分生理血糖范圍（0-432mg/dL）體外生物安全性良好。

圖13 用于葡萄糖監(jiān)測(cè)的基于微針的生物傳感器。（a-d）在整個(gè)微針貼片上制造了一種無(wú)酶葡萄糖電化學(xué)傳感器，其中含有WE、RE和CE。（a）制造順序。（b）微針陣列的SEM圖像（左），生長(zhǎng)有MWCNT的微針針尖（中），以及電沉積在MWCNT中的鉑納米顆粒（右）。（c）制作了三電極微針葡萄糖傳感器。（d）傳感器的電流響應(yīng)是PBS中葡萄糖濃度的函數(shù)。（e-h）基于空心硅微針陣列的CGM系統(tǒng)原型。（e）CGM原型的橫截面示意圖。（f）沒(méi)有微針陣列的設(shè)備的底視圖（左）和藍(lán)色液體對(duì)射流路徑的演示（右）。（g）微針CGM裝置在人體皮膚上的應(yīng)用。（h）應(yīng)用于人體的微針CGM裝置的傳感精度與商用血糖儀的比較。

14.用于蛋白質(zhì)和血清分析物檢測(cè)的微針生物傳感器

Miller等人開(kāi)發(fā)了一種類(lèi)似的空心微針生物傳感概念驗(yàn)證演示，用于蛋白質(zhì)檢測(cè)。通過(guò)雙光子聚合制備的空心微針與流體通道和電化學(xué)電極陣列集成（圖14a），以ISF中的肌紅蛋白/肌鈣蛋白檢測(cè)為目標(biāo)。Ranamukharachchi等人首次集成了一種用于萬(wàn)古霉素（VAN）快速體外傳感的空心微針光流體生物傳感器。用高密度肽固定的微針管腔用于VAN識(shí)別，作為反應(yīng)室，導(dǎo)致所需樣本量低（0.6nL）且響應(yīng)快（<5min），而集成光射流模塊為VAN定量提供了高靈敏度（0.41AU/decade）和低LoD（84nM）（圖14b-d）。為了解決將器件與IC和電源模塊的良好集成問(wèn)題，一個(gè)聰明的解決方案是通過(guò)相對(duì)較長(zhǎng)的空心微針直接從淺表血管采集血清樣本進(jìn)行非電子分析（圖14e-f）。通過(guò)在淺表血管上應(yīng)用一觸式激活血液多診斷系統(tǒng)（OBMS），可以通過(guò)生物相容性超銳鎳微針將大約30μl的血液提取到樣本室中。當(dāng)血液流經(jīng)聚砜膜時(shí)，對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行過(guò)濾。剩余的血清擴(kuò)散到反應(yīng)區(qū)進(jìn)行比色分析。通過(guò)簡(jiǎn)單地重新設(shè)計(jì)紙基傳感器，為診斷各種生物標(biāo)志物提供了一個(gè)強(qiáng)大的平臺(tái)。ISF中的葡萄糖檢測(cè)也采用了類(lèi)似的策略。 ?

圖14 用于蛋白質(zhì)和血清分析物檢測(cè)的基于微針的生物傳感器。（a）空心微針和射流通道集成生物傳感器用于ISF中肌紅蛋白/肌鈣蛋白的檢測(cè)。（b-d）用于快速體外萬(wàn)古霉素（VAN）傳感的空心微針光流體生物傳感器。（b）裝置橫截面示意圖和光流體分析機(jī)制。（c）分析時(shí)集成設(shè)備的圖像。插圖：空心微針的顯微照片。（d）與微針管腔結(jié)合的不同濃度分析物的吸收光譜。（e-f）基于空心微針和紙基傳感器的全集成、一觸式激活血液多診斷系統(tǒng)。（e）OBMS的機(jī)制和操作過(guò)程。（f）OBMS的組件。（g）OBMS在兔耳動(dòng)脈葡萄糖和膽固醇體內(nèi)診斷中的應(yīng)用。

15.其他基本生物標(biāo)記物檢測(cè)的微針生物傳感器

除了葡萄糖和蛋白質(zhì)傳感之外，研究人員開(kāi)始使用皮下微針?lè)椒▉?lái)監(jiān)測(cè)其他重要的生理生物標(biāo)記物（pH、K?、NO、ROS、酒精等），而不是常規(guī)的常規(guī)方法。例如，Miller及其同事將肌紅蛋白/肌鈣蛋白傳感裝置（圖15a）改進(jìn)為鉀離子（K?）監(jiān)測(cè)平臺(tái)。如圖15b所示，將一種用于高靈敏度NO檢測(cè)的氯化血紅素/聚乙二醇/聚多巴胺修飾的PCL微針電化學(xué)傳感器安裝在內(nèi)皮顯微鏡的探針上，并將該探針應(yīng)用于活體小鼠的結(jié)腸中。同時(shí)獲得息肉區(qū)域的光學(xué)圖像和腫瘤特異性NO信號(hào)的顯著增加。王的團(tuán)隊(duì)最近也報(bào)道了ISF的酒精監(jiān)測(cè)。將乙醇氧化酶固定的鉑絲、鉑絲和銀絲電極插入空心微針的內(nèi)腔進(jìn)行電化學(xué)傳感（圖15c），為功能性微針電極的制造提供了方便的策略。此外，為了保護(hù)微針電極上脆弱的微納傳感結(jié)構(gòu)免受透皮過(guò)程中的機(jī)械損傷，謝的團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了一種策略，在微針電極上噴涂可溶性聚合物（PVP），用于活性氧（ROS）的活體生物傳感。在該電化學(xué)傳感平臺(tái)中，PVP保護(hù)層被涂覆在我們沉積的脆弱rGO/Pt納米復(fù)合物的微針上。它提供了足夠的機(jī)械強(qiáng)度，以保護(hù)微針上的納米結(jié)構(gòu)免受損壞，并在IFS中快速溶解（<5分鐘），從而使微針表面正常工作（圖15d-e）。 ?

圖15 基于微針的生物傳感器，用于基本生理生物標(biāo)記物檢測(cè)。（a-b）微針傳感器和內(nèi)窺鏡設(shè)備集成了雙重診斷系統(tǒng)，用于實(shí)時(shí)癌癥特異性NO信號(hào)檢測(cè)。（a）在結(jié)直腸癌模型小鼠上應(yīng)用該系統(tǒng)進(jìn)行活體成像和傳感的示意圖。（b）實(shí)時(shí)活體內(nèi)顯微鏡成像小鼠結(jié)腸內(nèi)正常和息肉區(qū)域（黑色箭頭指示），并相應(yīng)檢測(cè)到NO信號(hào)。（c）用于監(jiān)測(cè)ISF中酒精的功能化線電極和空心微針組裝生物傳感器的插圖和圖像。（d-e）微針電化學(xué)平臺(tái)，帶有rGO/Pt納米顆粒固定和可溶性聚合物涂層，用于實(shí)時(shí)皮下ROS監(jiān)測(cè)。（d）微針ROS傳感器示意圖和WE的表面結(jié)構(gòu)。（e）PVP涂層傳感器插入豬皮和取出后的安培響應(yīng)，指非PVP涂層傳感器。

16.用于神經(jīng)科學(xué)研究的傳統(tǒng)電生理腦電極

與體外記錄相比，先進(jìn)的體內(nèi)膜片鉗記錄為活體神經(jīng)科學(xué)開(kāi)辟了一條新的道路。體內(nèi)膜片鉗記錄通常在顯微鏡下進(jìn)行，以發(fā)現(xiàn)和記錄大腦中標(biāo)記的神經(jīng)元。為了簡(jiǎn)化神經(jīng)元的預(yù)標(biāo)記，Kitamura等人開(kāi)發(fā)了一種新的陰影修補(bǔ)方法，通過(guò)在細(xì)胞外環(huán)境中預(yù)使用熒光染料將神經(jīng)元視為負(fù)像（圖16a，左圖），記錄的動(dòng)作電位呈現(xiàn)出與預(yù)標(biāo)記電位相似的質(zhì)量。為了實(shí)現(xiàn)用戶(hù)友好的操作，建立了自動(dòng)體內(nèi)貼片夾緊系統(tǒng)（圖16a，右圖），通過(guò)分析算法中細(xì)胞誘導(dǎo)的電極阻抗變化，精確定位細(xì)胞，具有良好的產(chǎn)量、吞吐量和信號(hào)質(zhì)量性能。隨著MEMS技術(shù)的發(fā)展，通過(guò)高效、標(biāo)準(zhǔn)的微加工技術(shù)，出現(xiàn)了復(fù)雜的硅基MEA。猶他州電極陣列（UEA）與堆疊式微絲MEA類(lèi)似，其常規(guī)配置包含10 × 10針桿和外露的導(dǎo)電硅尖端，該針桿最初由猶他大學(xué)開(kāi)發(fā)（圖16c）。為了進(jìn)一步提高深度上的空間分辨率，開(kāi)發(fā)了猶他傾斜電極陣列（USEA）來(lái)檢測(cè)不同深度上的神經(jīng)元信號(hào)。然而，由于UEA或USEA的固有結(jié)構(gòu)，深度空間分辨率仍然有限。

圖16 用于神經(jīng)科學(xué)研究的多功能腦電極。（a）用于神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢挥涗浐唾|(zhì)粒DNA傳遞電穿孔的活體膜片鉗和自動(dòng)膜片鉗。（b）傳統(tǒng)的微絲和堆疊的微絲。（c）猶他電極陣列的100個(gè)微電極。（d）單柄和多柄密歇根電極陣列。

17.用于神經(jīng)科學(xué)研究的多路復(fù)用式多功能腦電極陣列

基于密歇根式電極的高空間分辨率和可控制造，其他功能組件可以集成到同一設(shè)備中。在神經(jīng)科學(xué)中，神經(jīng)元調(diào)節(jié)是揭示復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中神經(jīng)元功能和相互作用的另一個(gè)重要方法。由于傳感電極可以作為刺激電極進(jìn)行多路復(fù)用，減少了設(shè)備的制造和集成復(fù)雜性，因此電刺激是首選的激活神經(jīng)元的方法。然而，電刺激具有空間分辨率較低和非特異性的缺點(diǎn)。為了解決電刺激的局限性，光遺傳學(xué)（optogenetics）提供了一種先進(jìn)的神經(jīng)元調(diào)節(jié)策略，在引入光敏蛋白的神經(jīng)元上使用特定波長(zhǎng)的光刺激，這種新的光模擬策略可以通過(guò)高時(shí)空刺激改善神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的分析。根據(jù)這一原理，高密度微型光學(xué)和光電元件趨向于通過(guò)先進(jìn)的MEMS技術(shù)集成在密歇根式探頭上，如圖17所示。

圖17 （a）光學(xué)元件集成多功能密歇根電極，用于光遺傳學(xué)應(yīng)用。（b）用于藥物輸送的微通道集成密歇根電極（頂部）和基于CMOS的神經(jīng)活動(dòng)高密度記錄（底部）。（c）用于ECoG和皮質(zhì)內(nèi)信號(hào)記錄的柔性電極陣列。（d）用于長(zhǎng)期腦定位和神經(jīng)記錄的可注射網(wǎng)狀電極。（e）多功能FEA，用于體內(nèi)神經(jīng)回路的同時(shí)光學(xué)刺激、電記錄和藥物輸送。

18.用于高通量和長(zhǎng)期神經(jīng)科學(xué)研究的半植入式腦電極陣列

MEA通常是用于高通量和長(zhǎng)期電生理記錄的半植入式設(shè)備。傳統(tǒng)的MEAs由多通道的單個(gè)無(wú)源傳感器組成，但是它們的互連體占用了很大的空間，這嚴(yán)重限制了活體神經(jīng)科學(xué)研究的高空間分辨率。Viventi等人采用基于硅納米膜的晶體管陣列進(jìn)行ECoG記錄，以克服這一限制。基于柔性晶體管陣列的結(jié)構(gòu)，數(shù)千個(gè)集成傳感器可以通過(guò)較少的導(dǎo)線以多路方式操作。通過(guò)360個(gè)電極記錄和繪制大腦皮層的活體活動(dòng)，如睡眠、視覺(jué)刺激和癲癇發(fā)作。從貓癲癇模型可以發(fā)現(xiàn)，癲癇發(fā)作的典型特征是螺旋波在皮層傳播，高空間分辨率設(shè)備可以以高時(shí)空分辨率偽彩色電影的形式直觀顯示（圖18a）。除了設(shè)備的高通量特性外，神經(jīng)電生理研究還需要長(zhǎng)期的慢性電記錄。對(duì)于穩(wěn)定的活體神經(jīng)科學(xué)研究，半植入式裝置可以實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞時(shí)空分辨率，但在長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)過(guò)程中，運(yùn)動(dòng)損傷和慢性炎癥會(huì)影響植入探針的功能和性能。Fu等人制造了一種柔性網(wǎng)狀電子設(shè)備，該設(shè)備與神經(jīng)元樣硬度具有生物相容性，可支持34周的小鼠大腦高質(zhì)量神經(jīng)元信號(hào)記錄（圖18b）。這種神經(jīng)元樣裝置可以記錄自由行為小鼠的強(qiáng)大單神經(jīng)元信號(hào)，為研究認(rèn)知和神經(jīng)退行性體內(nèi)模型奠定了良好的基礎(chǔ)。

圖18 通過(guò)半植入式設(shè)備進(jìn)行高通量和長(zhǎng)期神經(jīng)科學(xué)研究。（a）在短時(shí)間內(nèi)通過(guò)360個(gè)基于晶體管的陣列記錄高通量μECoG信號(hào)。晶體管陣列可以以各種模式直觀地顯示高時(shí)空分辨率的電影幀。（b）通過(guò)神經(jīng)元樣半植入式裝置長(zhǎng)期記錄慢性單神經(jīng)元34周。

19.用于在體光學(xué)傳感的半植入式腦電極傳感器

光學(xué)傳感和電化學(xué)傳感的發(fā)現(xiàn)對(duì)神經(jīng)科學(xué)的發(fā)展具有重要意義。最初的光學(xué)傳感大多基于熒光蛋白的單電極傳感。這種單電極光學(xué)生化傳感器為神經(jīng)科學(xué)的體內(nèi)研究提供了解決方案，并為現(xiàn)代精密電極的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。例如，GRABNE單電極傳感器可檢測(cè)活體小鼠、活體斑馬魚(yú)和自由放養(yǎng)小鼠的光遺傳學(xué)和行為學(xué)觸發(fā)的NE釋放（圖19a）。如圖19b所示，超靈敏蛋白鈣傳感器GCaMP6可靠地檢測(cè)神經(jīng)元胞漿中的個(gè)體動(dòng)作電位和單個(gè)樹(shù)突棘中定向調(diào)節(jié)的突觸鈣瞬變。隨著單電極成像的發(fā)展，雙光子成像和高精度多功能成像正在成熟。乙酰膽堿參與多種神經(jīng)活動(dòng)，但一直很難檢測(cè)到，通過(guò)半植入熒光雙光子成像設(shè)備在體內(nèi)成功檢測(cè)到（圖19c）。如圖19d所示，可以監(jiān)測(cè)急性GABA釋放行為，對(duì)于圖19e，可以測(cè)量多巴胺的瞬時(shí)變化量。從應(yīng)用前景來(lái)看，光傳感器的波分復(fù)用傳感將應(yīng)用于更多的場(chǎng)景。據(jù)報(bào)道，鈣敏感近紅外探針（NIR GECO1）與其他光遺傳學(xué)指示器和致動(dòng)器相結(jié)合，為多色鈣離子成像開(kāi)辟了新的前景（圖19f）。

圖19 半植入式活體腦光學(xué)傳感器。（a）基因編碼的GPCR激活型去甲腎上腺素傳感器，用于快速體內(nèi)去甲腎上腺素特異性檢測(cè)。（b）在小鼠視皮層2/3層錐體神經(jīng)元中，超靈敏蛋白鈣傳感器（GCaMP6）檢測(cè)到單個(gè)神經(jīng)元體細(xì)胞動(dòng)作電位和單個(gè)樹(shù)突棘中突觸瞬時(shí)鈣的靶向調(diào)節(jié)。（c）基于G蛋白偶聯(lián)受體激活的乙酰膽堿（GACh）傳感器對(duì)外源性和/或內(nèi)源性乙酰膽堿有選擇地作出反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)大的熒光信號(hào)，這些信號(hào)由多個(gè)動(dòng)物物種的表觀熒光、共焦和/或雙光子顯微鏡捕獲。（d）用于斑馬魚(yú)小腦表達(dá)的活體光片圖像的遺傳編碼GABA熒光傳感器。（e）用于體內(nèi)高分辨率多巴胺成像的基因編碼傳感器。（f）遺傳編碼的近紅外熒光鈣離子指示劑NIR-GECO1與光生指示劑和致動(dòng)器的光譜復(fù)用。

20.用于在體電化學(xué)傳感的植入式腦電極

與常見(jiàn)的電化學(xué)透皮傳感類(lèi)似，大腦中的電化學(xué)傳感依賴(lài)于工作電極和電分析技術(shù)。核酸適體修飾的微/納米電極已成為檢測(cè)腦內(nèi)生化物質(zhì)的主要方法。例如，據(jù)報(bào)道，一種基于電化學(xué)適體的體內(nèi)可卡因傳感器能夠直接從離散的大腦位置測(cè)量可卡因。此外，適體功能化神經(jīng)記錄電極成功探測(cè)到大腦中自發(fā)和誘發(fā)的神經(jīng)活動(dòng)（圖20a）。另一種基于電化學(xué)適體的傳感器支持連續(xù)、實(shí)時(shí)、多小時(shí)的測(cè)量，甚至在清醒、活動(dòng)的大鼠的血流中檢測(cè)到四種藥物（圖20b）。該電化學(xué)適體傳感器在臨床相關(guān)檢測(cè)限和高時(shí)間分辨率下實(shí)現(xiàn)了精確的分子測(cè)量，為生理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究提供了重要途徑。最近的一篇論文描述了一種透明、超柔性和有源多電極陣列，用于同時(shí)進(jìn)行光遺傳學(xué)和電化學(xué)傳感（圖20c）。

圖20 半植入式活體腦電化學(xué)傳感器。（a）（左）可卡因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的代表性矢狀圖。（右）全身靜脈注射可卡因的體內(nèi)檢測(cè)。（b）基于電化學(xué)適體的傳感器能夠?qū)η逍选⒒顒?dòng)大鼠的血流中的四種藥物進(jìn)行多小時(shí)實(shí)時(shí)測(cè)量。（c）有機(jī)電化學(xué)晶體管作為傳感器和有機(jī)場(chǎng)效應(yīng)晶體管作為多路復(fù)用器的集成，用于光遺傳大鼠中電信號(hào)的空間映射。

21.用于在體腦內(nèi)給藥的半植入式腦電極

近年來(lái)，藥物輸送系統(tǒng)經(jīng)常與多功能平臺(tái)（如光調(diào)制和信號(hào)記錄）結(jié)合使用，藥物輸送通道已根據(jù)應(yīng)用需求從單通道演變?yōu)槎嗤ǖ馈Ｈ鐖D21a所示，在細(xì)胞水平上應(yīng)用不同的刺激來(lái)研究和調(diào)節(jié)體內(nèi)的神經(jīng)回路，其中只有一個(gè)微流控通道用于藥物輸送。在圖21b所示的示例中，具有多種功能的神經(jīng)電極也能夠輸送多種藥物。如上所述的多功能電極包含多個(gè)藥物輸送通道，不僅可以輸送普通的神經(jīng)藥物，還可以輸送攜帶特殊基因的載體病毒（圖21c）。無(wú)線植入式藥物釋放電極的示例如圖21d-f所示。圖21d顯示，該無(wú)線電極可以分析單一藥物的劑量-反應(yīng)關(guān)系，或測(cè)試幾種不同藥物在嚙齒動(dòng)物大腦中的作用。圖21e和圖21d之間的主要區(qū)別在于藥物填充和流量可調(diào)特性。該技術(shù)能夠針對(duì)自由活動(dòng)動(dòng)物的特定神經(jīng)元群體。為了滿足無(wú)線、長(zhǎng)時(shí)間、重復(fù)和精確藥物輸送的更高要求，圖21f所示的多通道、無(wú)線、受控藥物輸送提供了可靠的解決方案。該方案表明，光射流設(shè)備能夠通過(guò)智能手機(jī)的藍(lán)牙應(yīng)用程序選擇性控制特定小鼠，通過(guò)觀察小鼠行為和腦內(nèi)特征的變化揭示神經(jīng)精神障礙的基礎(chǔ)。

圖21 半植入式腦內(nèi)給藥裝置。（a）一種多功能多柄單通道微流控釋藥神經(jīng)探針，用于研究和調(diào)節(jié)體內(nèi)遠(yuǎn)程神經(jīng)回路。（b）在體內(nèi)直接注射毛果蕓香堿，記錄四個(gè)神經(jīng)元通過(guò)微流控通道在5種不同濃度的毛果蕓香堿下進(jìn)行分類(lèi)。（c）通過(guò)雙通道微流控探針將攜帶視蛋白基因的病毒載體注射到野生型（WT）小鼠后，檢測(cè)野生型（WT）小鼠中視蛋白基因的表達(dá)。（d）通過(guò)單通道光射流系統(tǒng)將紅色染料無(wú)線輸送至大鼠模型的幻腦。（e）腦組織內(nèi)的多功能無(wú)線液體輸送可提供藥物再灌注和可調(diào)節(jié)的流速。（f）在一組同時(shí)行為的小鼠中對(duì)藥物輸送進(jìn)行無(wú)線選擇性控制。

審核編輯 ：李倩