游離氨基酸是動物體內(nèi)重要的代謝物小分子,特定種類或者多種氨基酸濃度變化對于動物機體營養(yǎng)和健康狀態(tài)評估具有重要意義。目前,游離氨基酸的檢測主要通過液相色譜儀、氨基酸分析儀等儀器來實現(xiàn),儀器設(shè)備昂貴,需要對氨基酸進行衍生化處理,且難以實現(xiàn)動態(tài)監(jiān)測。近年來,生物傳感器的研制獲得了快速發(fā)展,可植入式和可穿戴式生物傳感器的研發(fā)成為前沿?zé)狳c。針對氨基酸檢測的生物傳感器也得到了發(fā)展,但存在穩(wěn)定性不強和生物相容性問題待改善等問題。多肽適配體(肽適體)生物傳感器的構(gòu)建是有望逐步解決這些問題的途徑之一。
中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所農(nóng)牧復(fù)合生態(tài)研究與畜禽健康養(yǎng)殖研究中心利用生物信息學(xué)技術(shù),通過搜集豬、人、小鼠以及大鼠的氨基酸代謝相關(guān)蛋白29185條,形成氨基酸代謝相關(guān)蛋白庫;依據(jù)庫中蛋白一級序列獲得含約285萬種八肽的肽庫;采用AOTODOCK軟件在規(guī)模計算平臺上對和20種氨基酸有特異結(jié)合力的多肽進行初步篩選,獲得具有單一氨基酸特異結(jié)合性的八肽653條,平均每種氨基酸33條。隨后,使用等溫滴定量熱儀(Isothermal titration calorimeter)對多肽與氨基酸模擬結(jié)合的效果進行驗證,獲得了具有特異性氨基酸識別能力的肽適體。使用通過驗證的肽適體(以特異性識別精氨酸的肽適體為例)進行電化學(xué)阻抗型傳感器的構(gòu)建,對氨基酸進行檢測發(fā)現(xiàn),在0.1pM~0.1μM范圍內(nèi),構(gòu)建的生物傳感器與精氨酸濃度具有良好的線性,y=704.5log(c)+11329.0, (R2=0.9925),在血清樣品的檢測中也得到了良好的效果。

氨基酸肽適體的篩選和電化學(xué)阻抗型傳感器的構(gòu)建
該項研究為可植入式或可穿戴式氨基酸檢測傳感器開發(fā)基于肽適體的生物傳感器提供了基礎(chǔ)。目前該項研究已產(chǎn)生國內(nèi)發(fā)明專利申請4項(201711183711.7、201810004249.8、201910604881.0、201910604886.3),PCT國際專利申請1項(PCT/CN2019/119036),獲得國內(nèi)專利1項(ZL201721581311.7);近期以題為An electrochemical impedimetric sensing platform based on a peptide aptamer identified by high-throughput molecular docking for sensitive L-arginine detection發(fā)表在國際期刊Bioelectrochemistry上。該項研究得到了國家自然科學(xué)基金國家重大科研儀器研制項目(自由申請)(31527803)的資助。
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